产品货号：
SN0062
中文名称：
T4 DNA连接酶
英文名称：
T4 DNA Ligase,5U/μL
产品规格：
1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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简要说明：
产品特点：
适用范围：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
注意事项：
使用方法：
相关搜索：T4 DNA连接酶，T4 DNA Ligase,5U/μL
T4 DNA连接酶是从一种携带T4 DNA连接酶基因的大肠杆菌中表达制备而成。该酶能够催化双螺旋DNA或RNA之间的5'-磷酸基团和3'-羟基之间形成磷酸二酯键。该酶在双链DNA、RNA或者DNA/RNA复合物间可修复单链缺刻，并且可以连接有粘性末端或者平末端的DNA片段，但对于单链核酸无活性。T4 DNA连接酶需要ATP作为辅助因子，在室温下完成粘性末端连接反应仅需10分钟。
产品特点：
- 快速连接，最快仅需10min。
- 纯度高，无核酸酶活性残留。
适用范围：
适用于酶切产物DNA片段的克隆、线性DNA自环化和接头连接等实验。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| T4 DNA Ligase(5U/μL) | 200μL |
| 10×T4 DNA Ligase Buffer | 1.0mL |
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
- 核酸内切酶残留检测：37℃条件下，将200U的T4 DNA Ligase与1μg的pUC19 DNA温育4h，未检测出由共价闭合环状DNA转变为带有缺刻的DNA。
- 核酸外切酶残留检测：将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
注意事项：
- 10×T4 DNA Ligase Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。
- 在浓度高于200mM的NaCl或KCl中T4 DNA Ligase的活性会被强烈抑制。
- 连接反应液添加量不应该超过感受态细胞体积的10%，不推荐体系中加入过量的T4 DNA Ligase。
- 与T4 DNA Ligase结合的DNA可能会在琼脂糖凝胶中出现带移或弥散。为了避免此现象，可以在上样前对酶进行热失活，必要时加入适量的SDS。
- 通过对T4 DNA Ligase热失活或者使用离心柱或者氯仿抽提纯化DNA方式可能提高电转化的效率。
- 延长反应时间到1h可以增加转化子数目。
使用方法：
- 在冰上配制如下反应体系。
成分 用量 线性化载体DNA 20～100ng 插入片段DNA 3:1～10:1（片段与载体摩尔比） 10×T4 DNA Ligase Buffer 2μL T4 DNA Ligase 1μL ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，22℃温育10min。
- 取10μL的连接产物用于100μL化学感受态细胞的转化，或者取1～2μL用于50μL电转感受态细胞的转化。
- 如果连接反应产物用于电转化，应使用离心柱或者氯仿抽提清洁DNA代替热失活步骤。
- 平末端连接时反应条带为22℃，1h。为了提高连接效率，可在20μL反应体系中可以加2μL 50% PEG8000。
- 如果连接反应产物用于电转化，应使用离心柱或者氯仿抽提清洁DNA代替热失活步骤。
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